• 2017年第27卷第6期文章目次
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    • >研究报告
    • 食蟹猴自发性高血压及患病危险性的相关性研究

      2017, 27(6):1-5. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.001

      摘要 (2781) HTML (0) PDF 716.04 K (2301) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 建立各年龄段食蟹猴血压参考值。方法 采用美国Beckman-CX4全自动生化分析仪和北京松下电工有限公司的腕式电子血压计,检测521只食蟹猴血压及血脂指标,对测定结果进行统计检验。结果 经统计分析,不同年龄段的食蟹猴血压值差异显著,老年组食蟹猴血压值高于其它年龄组;老年组食蟹猴高血压的发病率高于其他年龄组,高血压组食蟹猴身体质量指数(body mass index, BMI)高于同年龄组血压正常的食蟹猴;老年组高脂血症食蟹猴高血压发病率高于其他年龄组。Logistic回归分析显示,年龄、BMI及高脂血症在预测高血压组的患病危险性的预测能力分别为血压正常组的1.435、1.218、2.337倍。结论 初步建立不同年龄段食蟹猴的血压参考值。年龄、BMI、高脂血症为食蟹猴自发性高血压的危险因素,基础血压值测量为食蟹猴自发性高血压模型筛选及其相关研究提供了依据。

    • 右美托咪定鞘内注射对慢性神经痛模型大鼠行为能力、疼痛程度和脊髓背角蛋白激酶C表达的影响

      2017, 27(6):6-11,32. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.002

      摘要 (2051) HTML (0) PDF 5.11 M (2092) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 分析右美托咪定鞘内注射对于慢性神经痛模型鼠的行为、疼痛程度脊髓背角蛋白激酶C(protein kinase C,即PKC)的影响,初步探讨右美托咪定的镇痛机制。方法 将50只成功建立模型的大鼠随机分为观察组、模型组,另选取25只健康大鼠作为对照组,观察组和模型组大鼠建立慢性坐骨神经损伤模型,在建模后,观察组应用右美托咪定鞘内注射干预,模型组应用生理盐水注射,对照组不接受干预,在建模前、给药后3、5、7、14 d时分别进行行为能力评价(累积评分法和运动功能评价)和疼痛程度评价(机械性缩足反射法和热缩足反射潜伏期法检测痛阈值),同时进行PKC免疫染色评分(免疫组化SABC法)、PKCmRNA检测(RT-PCR法)和PKC蛋白(Western blot法)表达,利用统计方法分析组间数据。结果 (1)建模前,各组大鼠行为累积评分、运动功能评分、机械性缩足反射法(MWT)、热缩足反射潜伏期法(TWL)差异无显著性(P>0.05),在建模后,模型组和观察组大鼠累积评分和运动功能评分显著升高,MWT和TWL明显下降,其中观察组变化幅度显著低于模型组,建模后,组间累积评分、运动功能评分、MWT、TWL具有明显差异(P<0.05);(2)对照组PKC为阴性表达,模型组PKC呈强阳性表达,观察组建模后初期PKC为强阳性,随着治疗时间延长,PKC表达强度降低,第14天时PKC为弱阳性表达;(3)建模后,观察组和模型组PKCmRNA和PKC蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05);随着不断给药,观察组PKCmRNA和PKC下降,在给药14 d时,PKCmRNA和PKC接近对照组,建模后3 d起,在相同时间点,观察组PKC表达量显著低于模型组(P<0.05)。结论 右美托咪定鞘内注射能够改善慢性神经痛模型大鼠行为能力、降低疼痛程度,可能与其抑制脊髓背角蛋白激酶C的表达相关。

    • 五指山小型猪、西藏小型猪和巴马小型猪对外源性脂肪的敏感性观察

      2017, 27(6):12-16. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.003

      摘要 (2343) HTML (0) PDF 1006.71 K (1538) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 观察五指山小型猪、西藏小型猪和巴马小型猪对外源性脂肪的敏感性。方法 取雄性五指山小型猪、西藏小型猪和巴马小型猪各5只,分别采用静脉注射脂肪乳和饲喂高脂饲料,分别检测静脉注射脂肪乳后0.5、1、1.5、2、2.5、3 h和饲喂高脂饲料后12、24、36、48、60、72、84、120 h的血清胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平,并计算曲线下面积变化ΔAUC值。结果 注射脂肪乳后3种小型猪甘油三酯(TG)均明显升高(P<0.01),在注射后0.5 h达到峰值,其升高程度和ΔAUC值高低依次为西藏小型猪>五指山小型猪>巴马小型猪,而TC、LDL-C和HDL-C则无明显变化(P>0.05);高脂饲料饲喂饮食诱导后3种小型猪TC、LDL-C、HDL-C和TG均明显升高(P<0.05,P<0.01),其中,五指山小型猪TC、LDL-C在饲喂后36 h、HDL-C在饲喂后48 h、TG在饲喂后24 h达到峰值,巴马小型猪和西藏小型猪TC、LDL-C、HDL-C在饲喂后48-60 h、TG在饲喂后36 h达到峰值,TC、LDL-C、HDL-C的ΔAUC值高低依次为五指山小型猪>巴马小型猪>西藏小型猪。结论 静脉注射脂肪乳3种小型猪对TG敏感,脂耐量值高低依次为西藏小型猪>五指山小型猪>巴马小型猪;高脂饲料饲喂对3种小型猪TC、LDL-C、HDL-C敏感,脂耐量值高低依次为五指山小型猪>巴马小型猪>西藏小型猪。

    • 阿尔茨海默病样三重转基因小鼠血小板的功能改变及机制探讨

      2017, 27(6):17-21. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.004

      摘要 (2460) HTML (0) PDF 2.63 M (2007) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 探讨常见的阿尔茨海默病(AD)小鼠模型APP/PS-1/tau(3xTg)小鼠血小板功能变化情况及机制分析。方法 实验小鼠分为3xTg-AD组和WT组;采用流式细胞术和粘附试验等方法评价3xTg-AD和WT小鼠血小板的功能;并采用Western blotting方法对其机制进行探讨。结果 老年3xTg-AD小鼠血小板计数和糖蛋白表达与对照WT小鼠差异无统计学意义(P>0.05)。但是与对照WT小鼠相比,3xTg-AD小鼠血小板与纤维蛋白原的粘附能力增强(P<0.05)。此外,与纤维蛋白原粘附功能增强的3xTg-AD小鼠血小板信号蛋白的磷酸化也增加,包括PI3激酶Akt和p38MAP激酶(P<0.05)。然而,两组小鼠中由激动剂诱导的活化血小板无统计学差异(P>0.05)。结论 3xTg-AD小鼠循环血液中血小板粘附功能增加,可能与AD疾病的进展相关。

    • SGT基因杂合缺失小鼠血液生理生化指标分析

      2017, 27(6):22-26. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.005

      摘要 (1782) HTML (0) PDF 2.28 M (2270) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 分析SGT基因杂合缺失对不同年龄小鼠血液指标和代谢的影响。方法 分别采集10周龄、26周龄SGT基因杂合缺失(SGT+/-)小鼠和野生型小鼠眼眶血液,用全自动血细胞分析仪和生化分析仪检测常用血液生理指标和生化指标,进行不同年龄和基因型间统计比较。结果 与同基因型低龄小鼠对比,高龄小鼠多项血液生理生化指标均发生增龄性改变。与同龄野生型对照相比,10周龄SGT+/-小鼠大血小板比率降低,未结合型胆红素浓度降低(P<0.05),其余指标均未见统计学差异;26周龄SGT+/-小鼠血小板计数、血小板比容和中性粒细胞计数降低,碱性磷酸酶、未结合型胆红素、胆固醇及甘油三酯等指标改变有统计学意义(P<0.05)。结论 SGT基因杂合缺失能够诱发高龄小鼠部分血液、血清生化指标的改变。

    • miR-214通过靶向调控E2F3抑制肝癌细胞的增殖

      2017, 27(6):27-32. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.006

      摘要 (2490) HTML (0) PDF 3.07 M (1779) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 探讨miR-214通过靶向调控E2F转录因子3(E2F3)抑制肝癌细胞的增殖。方法 RT-PCR法检测细胞株SMMC-7721、HepG2、SK-Hep-1和Huh 7中miR-214的表达量,并利用脂质体转染miR-214 NC及miR-214 mimics。采用MTT法检测miR-214对肝癌细胞活力的影响;Hoechst染色试剂盒检测miR-214对细胞凋亡的影响,流式细胞术检测miR-214对细胞周期的影响;Western blot及RT-PCR法检测miR-214对肝癌细胞中E2F3蛋白及mRNA表达量的影响,并通过荧光素酶报告基因进行验证。结果 SMMC-7721、SK-Hep-1、Huh 7及HepG2中miR-214的表达量分别为(0.83±0.08)、(0.32±0.03)、(0.33±0.03)、(0.08±0.01),其中HepG2中miR-214表达量最低,因此选用HepG2作为后续实验细胞株。HepG2细胞转染miR-214 NC及miR-214 mimics、miR-214 mimics组中miR-214表达量(0.65±0.06)明显高于miR-214 NC组(0.14±0.01),miR-214 mimics组细胞活力(0.35±0.03)明显低于miR-214 NC组(0.69±0.06),miR-214 mimics组细胞凋亡率(36.37±3.43)%明显高于miR-214 NC组(3.74±0.34)%,miR-214 mimics组G1期明(57.79±5.78)显长于miR-214 NC组(45.319±4.53),miR-214 mimics组中E2F3蛋白[(0.23±0.02)、(0.24±0.02)]及mRNA表达量明显低于miR-214 NC组[(0.98±0.09)、(0.99±0.10)],差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-214过表达能通过下调E2F3表达抑制肝癌细胞的增殖。

    • 鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium感染C57BL/6小鼠肠道模型的建立及表型分析

      2017, 27(6):33-36,45. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.007

      摘要 (3020) HTML (0) PDF 6.06 M (7215) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 建立鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium感染C57BL/6小鼠肠道模型。方法 先用5% NaHCO3溶液灌胃,中和部分胃酸,提高鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium的感染能力,随后进行鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium灌胃攻毒。观察小鼠的临床症状,对小鼠的生存情况及体重进行统计学分析,并通过组织病理切片分析小鼠肠道组织病理变化等。结果 鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium攻毒后C57BL/6小鼠出现体重下降、萎靡不振、寒颤及死亡等表型,解剖学水平显示小鼠肠道充血膨胀。病理分析结果显示小鼠小肠绒毛间质水肿、肠粘膜层坏死及炎性细胞浸润等。结论 成功建立鼠伤寒沙门氏菌S.Typhimurium感染C57BL/6小鼠肠道模型,该模型在研究相关免疫分子或细胞因子在S.Typhimurium引发肠炎过程中的生物学功能及治疗等方面具有重要的科学意义。

    • 颈内动脉刺破法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型

      2017, 27(6):37-45. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.008

      摘要 (2482) HTML (0) PDF 1.54 M (2587) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 通过图文结合的形式,详细介绍大鼠蛛网膜下腔出血模型的制作方法及过程;改进并创新模型,使其能更好的模拟临床动脉瘤破裂所致蛛网膜下腔出血。方法 选取SD雄性大鼠,采用颈内动脉颅外段穿入颈内段法,建立SD雄性大鼠蛛网膜下腔出血模型,用呼吸、瞳孔、大小便及留置纤芯解剖大鼠头颈等方法对模型进行验证。通过观察死亡率和临床表现,探讨模型的可控性、可重复性。结果 实现了刺破血管造成蛛网膜下腔出血,且纤芯到达的位置能准确的刺破所需要的血管。结论 此法制作模型稳定,方法通俗易懂,操作精巧灵活,可重复性强,理解后短时间内就可造模成功,且成功造模所形成的蛛网膜下腔出血,能更好地模拟临床动脉瘤突然破裂出血,非常适用于蛛网膜下腔出血早期脑损害及其血管痉挛的研究。

    • 改良麻醉方法对山羊麻醉效果的观察

      2017, 27(6):46-48. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.000

      摘要 (2524) HTML (0) PDF 669.80 K (2008) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 通过与原有山羊麻醉方法的对比,观察改良后的麻醉方法的麻醉效果,为动物造模过程中的山羊麻醉提供理论和实践参考。方法 选取制造胫骨骨折模型的山羊72只,36只采用原有麻醉方法即肌内注射速眠新联合地西泮(A组),36只采用改良后麻醉方法即肌内注射速眠新、地西泮联合泵注丙泊酚(B组)。观察山羊术中挣扎次数、追加速眠新总剂量、麻醉致死率及苏醒时间。结果 A组动物麻醉致死率为16.67%,B组无动物死亡;A组动物挣扎次数及追加速眠新总剂量、苏醒时间为均大于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 改良后的麻醉方法可以减少动物的挣扎次数,减少麻醉药的用量,降低动物的死亡率。

    • 六种固定液对小鼠角膜固定效果的比较

      2017, 27(6):49-52. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.010

      摘要 (2993) HTML (0) PDF 2.64 M (2967) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 观察6种不同固定液固定下,小鼠角膜的组织形态学特征并筛选出适合角膜固定的固定液。方法 取60只NIH小鼠眼球,随机分为6组,每组10只,分别固定于6种固定液中,即95%乙醇、10%中性甲醛、Bouin's液、甲醛-乙酸固定液和Davidson's液。固定完成后,标本经80%、95%、100%梯度酒精脱水,TO型生物制片透明剂透明,石蜡浸泡,最后石蜡包埋。石蜡切片厚度均为4 μm,分别做HE染色,显微镜下观察形态学特征并对角膜各区域厚度进行测量分析。结果 不同固定液固定的小鼠角膜组织形态及厚度各具特征,而甲醛-乙酸液固定后的角膜组织细胞形态改变小。结论 甲醛-乙酸液固定后组织细胞形态改变小,是比较合适的小鼠角膜固定液。

    • >技术方法
    • 恒河猴大脑中动脉M1段栓塞建模中麻醉方案的选择

      2017, 27(6):53-55,62. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.011

      摘要 (2115) HTML (0) PDF 1.27 M (2039) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 为需要进行大脑中动脉M1段栓塞模型建立的恒河猴及其它大型实验动物提供一种简捷、迅速、安全的麻醉方法。方法 采用健康成年恒河猴20只,均为雄性,年龄7~9岁,体重7~11 kg,基础麻醉应用0.1 mL/kg氯胺酮及速眠欣的混合液肌内注射,待动物入睡后行气管插管(ID:4.5~5.5#)。随后送入介入中心,入室后连接监护并建立静脉通路,完成有创动脉压及导尿管置入等。术中实验动物采用呼吸机控制呼吸,丙泊酚2~4 mg/kg/h持续泵入进行麻醉维持,术中根据动物的生命体征和肢体活动情况变化调整剂量,必要时追加上述氯胺酮与速眠新的混合液,并根据手术的需要调整心率、血压、体温等。溶栓前后行脑MRI造影,造影时停止输注麻醉药物,恢复动物自主呼吸。术中监测实验动物的心率、体温、有创动脉血压及血氧饱和度,并于麻醉诱导后和术中抽取动脉血行血气分析。结果 共进行实验20次,均按预计方案实施完成,术中未发生动物躁动、呼吸抑制、心律失常等严重并发症,实验结束停药后,实验动物很快清醒并送回动物实验中心,进行后续处理。20只恒河猴15只存活24 h以上,5只死于溶栓后脑出血和大面积脑梗死面积较大。结论 气管内插管全身麻醉合并复合麻醉维持为此类比较复杂的介入及MRI实验的顺利完成提供了一种安全、实用的麻醉方式。

    • 实验树鼩空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺菌多重荧光定量PCR方法的建立

      2017, 27(6):56-62. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.012

      摘要 (2437) HTML (0) PDF 5.01 M (2392) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的 为实验树鼩微生物检测提供一种快速、简便、灵敏,并且特异性强的空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺菌多重荧光定量PCR检测方法。方法 根据空肠弯曲菌的HipO区域、沙门菌的inV区域和志贺菌的ipaH区域设计特异性引物和探针,并进行单病原定量PCR检测验证;后分析多重PCR的灵敏度和特异性,并使用该多重PCR方法检测实验树鼩样品。结果 本研究的PCR要素可用于空肠弯曲菌、沙门氏菌及志贺菌等单种菌的实时荧光定量PCR扩增。多重定量PCR扩增出了空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺氏菌标准扩增曲线;该方法的灵敏度为1×103 ng/μL;特异性检测未从其他参考菌株中检出阳性。结论 该多重定量PCR方法在实验树鼩微生物检测中具有很好的应用和推广前景。

    • >经验交流
    • 探讨药物GLP试验用Beagle犬检疫验收的技术要点

      2017, 27(6):63-67. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.013

      摘要 (2651) HTML (0) PDF 704.65 K (1835) 评论 (0) 收藏

      摘要:实验动物的检疫验收是一项控制动物在流通环节免受污染、防止疫病发生和传播的重要工作,是实现实验动物质量标准化的关键。Beagle犬因其遗传稳定,对环境的适应能力和抗病力较强,在试验中反应一致性好,是被国际所公认的专用实验犬,在药物安全性评价实验中应用广泛。建立药物GLP机构试验用Beagle犬检疫验收的标准操作规程,细化检疫验收的技术要点,加强检疫人员的技术培训,努力提高检疫水平,最终确保实验动物质量。

    • 流感病毒动物实验生物安全实践与探讨

      2017, 27(6):68-71. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.014

      摘要 (2490) HTML (0) PDF 706.96 K (2648) 评论 (0) 收藏

      摘要:流感病毒动物感染实验具有一定生物危害风险,对研究人员乃至公众的健康都会造成威胁。不同型和亚型的流感病毒的危险度又有所不同,故本文梳理了国内外有关法规标准及文献资料并结合工作实践,针对流感病毒动物感染实验生物安全分级及生物安全管理进行探讨。

    • >综述与专论
    • 乙型病毒性肝炎动物模型的比较分析

      2017, 27(6):72-76. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.015

      摘要 (2353) HTML (0) PDF 701.73 K (2933) 评论 (0) 收藏

      摘要:全世界有近2.4亿慢性乙型病毒性肝炎(HBV)患者,尽管已有HBV疫苗和抗病毒治疗药物的产生,但乙肝仍是严重威胁人类健康的传染病。由于缺乏理想的动物模型,使得对于乙型病毒性肝炎的研究受到局限。本综述按照现有HBV动物模型进行对比分析,探讨各种模型病原学和病理与病理生理学应用的区别,以期为科研人员在今后的HBV研究中更好的利用相关资源,提供参考。

    • HIV-1病毒与浆细胞样树突状细胞的相互作用

      2017, 27(6):77-81. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.016

      摘要 (2162) HTML (0) PDF 748.49 K (2433) 评论 (0) 收藏

      摘要:浆细胞样树突状细胞(plamcytoid dendritic cells,pDCs)是一类可以产生大量I型干扰素(interferon α,IFN-α)的固有免疫细胞。在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)急性感染期,pDCs通过分泌IFN-α抑制病毒复制并激活适应性免疫应答。在HIV慢性感染期,pDCs通过调节免疫细胞发挥免疫抑制的作用,不断破坏淋巴细胞,从而造成免疫系统崩溃,促进疾病进程。本文将就HIV-1与pDCs之间的相互作用做一综述。

    • CD45分子在HIV-1病毒感染中的作用研究进展

      2017, 27(6):82-85,91. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.017

      摘要 (1862) HTML (0) PDF 1.76 M (2185) 评论 (0) 收藏

      摘要:CD45分子是具有磷酸酶活性的跨膜蛋白,在免疫细胞中发挥重要作用。CD45分子对抗原受体信号转导是必需的,并具有调节细胞凋亡的作用,其功能紊乱会导致自身免疫性疾病、免疫缺陷、恶性肿瘤等。CD45分子的结构及其功能与HIV感染之间的关系是艾滋病研究领域的重要内容之一,本文就CD45分子在HIV感染中的作用作一综述。

    • 斑马鱼模型在常见骨疾病研究中的应用

      2017, 27(6):86-91. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.018

      摘要 (2203) HTML (0) PDF 775.15 K (2700) 评论 (0) 收藏

      摘要:斑马鱼作为一种新型的脊椎模式生物,近年来在人类疾病模型中已广泛应用,特别是在人类骨疾病模型的研究中已显示出优势,如在疾病的相关基因及其功能表达和药效筛选评价等方面。这对于在骨疾病领域发挥特色疗效的传统医药而言,也具有重大的现实意义。本文就斑马鱼在骨质疏松、骨折、骨关节炎等常见骨疾病中的研究应用进行综述,以便给未来的临床相关研究提供一定的思路。

    • 右心衰竭动物模型的建立和比较

      2017, 27(6):92-97. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.06.019

      摘要 (3058) HTML (0) PDF 742.97 K (3947) 评论 (0) 收藏

      摘要:右心衰竭(RVF)是一种严重危害人类生命健康的临床综合征。RVF动物模型的建立与应用,是研究RVF发病机制、病理生理学和防治方案的关键环节。近年来,众多学者对RVF模型的建立方法、检测指标等方面进行了深入研究,使得造模成功率、模型质量得到很大提高。虽然RVF动物模型较多,但由于造模方法不一,选材及处理条件不同,目前尚无公认的实验模型。本文将对已报道的RVF动物模型的建立方法、造模原理进行归纳整理和比较评价,为今后在RVF研究中的选择和应用提供参考。

    • >继续教育
    • 医学研究生培养中的实验室安全教育

      2017, 27(6):98-98.

      摘要 (1628) HTML (0) PDF 617.94 K (1316) 评论 (0) 收藏

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