摘要:目的 建 立 Sprague Dawley ( SD) 大鼠的正常膝关节滑膜细胞原代培养 方法及脂多糖 (Lipopolysaccharides,LPS)诱导成纤维样滑膜细胞( fibroblast-like synoviocytes,FLS) 炎症模型。 方法 选取 80 ~ 120 g SPF 级幼年 SD 大鼠, 分离其滑膜组织,原代培养至第 3 代,用组织化学染色法和 EdU 法检测 FLS 蛋白标志物 vimentin 和增殖功能。同时,用滑膜组织作对照,检测第 3 代至第 8 代原代培养 FLS 的特征蛋白表达,筛选具有生理功能的高纯度且可用于后续实验的 FLS 细胞。 LPS 诱导 FLS 炎症后,检测 LPS 制激 FLS 不同时间点的 IL-1β 和 TNF-α 的 mRNA 和蛋白表达,根据实验结果确定 LPS 成功诱导 FLS 炎症模型的时间点。最后,检测 FLS 被 LPS 诱导前后的细胞因子、增殖功能和特征蛋白的表达,为分析 FLS 炎症模型提供实验数据。 结果 采用 0. 2% I 型胶 原酶消化法,成功培养了 FLS 原代细胞。经检测蛋白标志物 vimentin, 第 3 代 FLS 纯度达 98%以上。通过 FLS 特 征蛋白检测,筛选出具有生理功能且可用作后续实验的 FLS 为第 3 代至第 7 代原代细胞。通过对 LPS 诱导后的 FLS 的细胞因子和特征蛋白分析,确定 1 μg / mL LPS 诱导 FLS 细胞 3 h,能复制出 FLS 炎症模型。 结论 LPS 诱导 的 FLS 炎症模型可作为体外研究炎性关节病的细胞模型。