首页期刊介绍编委会投稿指南期刊订阅广告合作留言板联系我们English
熊 翱,熊仁平,彭 艳,李 宇,江 旭,许建中.脂多糖诱导 SD 大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞炎症模型建立及特征分析[J].中国实验动物学报,2020,28(4):436~446.
脂多糖诱导 SD 大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞炎症模型建立及特征分析
Establishment and characteristic analysis of a model of knee fibroblast-like synoviocytes inlipopolysaccharide-induced Sprague-Dawley rats
投稿时间:2020-04-23  
DOI:10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2020. 04. 002
中文关键词:  成纤维样滑膜细胞  原代培养  波形蛋白  炎性关节病  模型
英文关键词:fibroblas-like synoviocytes  primary culture  vimentin  inflammatory joint disease  model
基金项目:
作者单位E-mail
熊 翱 1.郑州大学第一附属医院骨科,郑州 450052
2. 中国人民解放军陆军特色医学中心野战外科研究部,重庆 400042 
2528359578@ qq.com 
熊仁平 中国人民解放军陆军特色医学中心野战外科研究部,重庆 400042 13937133786@ 163.com 
彭 艳 中国人民解放军陆军特色医学中心野战外科研究部,重庆 400042  
李 宇 郑州大学第一附属医院骨科,郑州 450052  
江 旭 郑州大学第一附属医院骨科,郑州 450052  
许建中 郑州大学第一附属医院骨科,郑州 450052 xiong_ren_ping@ 163.com 
摘要点击次数: 194
全文下载次数: 287
中文摘要:
      目的 建 立 Sprague Dawley ( SD) 大鼠的正常膝关节滑膜细胞原代培养 方法及脂多糖 (Lipopolysaccharides,LPS)诱导成纤维样滑膜细胞( fibroblast-like synoviocytes,FLS) 炎症模型。 方法 选取 80 ~ 120 g SPF 级幼年 SD 大鼠, 分离其滑膜组织,原代培养至第 3 代,用组织化学染色法和 EdU 法检测 FLS 蛋白标志物 vimentin 和增殖功能。同时,用滑膜组织作对照,检测第 3 代至第 8 代原代培养 FLS 的特征蛋白表达,筛选具有生理功能的高纯度且可用于后续实验的 FLS 细胞。 LPS 诱导 FLS 炎症后,检测 LPS 制激 FLS 不同时间点的 IL-1β 和 TNF-α 的 mRNA 和蛋白表达,根据实验结果确定 LPS 成功诱导 FLS 炎症模型的时间点。最后,检测 FLS 被 LPS 诱导前后的细胞因子、增殖功能和特征蛋白的表达,为分析 FLS 炎症模型提供实验数据。 结果 采用 0. 2% I 型胶 原酶消化法,成功培养了 FLS 原代细胞。经检测蛋白标志物 vimentin, 第 3 代 FLS 纯度达 98%以上。通过 FLS 特 征蛋白检测,筛选出具有生理功能且可用作后续实验的 FLS 为第 3 代至第 7 代原代细胞。通过对 LPS 诱导后的 FLS 的细胞因子和特征蛋白分析,确定 1 μg / mL LPS 诱导 FLS 细胞 3 h,能复制出 FLS 炎症模型。 结论 LPS 诱导 的 FLS 炎症模型可作为体外研究炎性关节病的细胞模型。
英文摘要:
      Objective To establish synovial cell primary cultures and a lipopolysaccharide ( LPS)-induced fibroblast-like synoviocyte ( FLS) inflammatory model of a normal knee joint in Sprague-Dawley ( SD) rats. Methods Normal knee joint synovium (80-120 g) was separated from specific-pathogen-free SD rats in an ice bath with phosphate- buffered saline. The primary synovium was cultured to the 3rd generation. Vimentin expression and FLS proliferation were detected via immunohistochemical staining and the 5-ethynyl-2′-deoxyuridine method. Synovial tissue was used as a control to detect characteristic protein expressions in the FLS in the 3rd-8th generations of primary culturing and to screen the FLS for high purity and physiological functions for use in subsequent experiments. After LPS-induced FLS inflammation, the mRNA and protein expressions of IL-1β and TNF-α were detected at different time points to determine the time point at which LPS could successfully induce an FLS inflammatory model. Finally, the cytokine expression, proliferative functions and characteristic proteins of the FLS before and after LPS induction were detected to provide experimental data to evaluate the FLS inflammatory model. Results FLS primary cells were successfully cultured with 0. 2% collagenase I digestion. The FLS purity in the 3rd generation exceeded 98% for detecting vimentin. By detecting characteristic FLS proteins, FLS with physiological functions that could be used for subsequent experiments were selected as the primary cells from the 3rd-7th generations. Analyzing the cytokines and characteristic proteins in FLS before and after LPS induction revealed that 1 μg / mL LPS is required to stimulate FLS cells for 3 h to replicate the FLS inflammatory model. Conclusion The LPS- induced FLS inflammatory model can be used to study inflammatory arthritis in vitro.
查看全文  查看/发表评论  下载PDF阅读器
关闭
您是第 1769959 位访问者
版权所有:中国实验动物学会 主管单位:中国科学技术协会 主办单位:中国实验动物学会    中国医学科学院医学实验动物研究所
地  址: 北京市朝阳区潘家园南里5号 邮编:100021 电话:010-67779337 E-mail:bjb2@cnilas.org
本系统由北京勤云科技发展有限公司设计
微信关注二维码