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黄小荣,黄衍恒,叶霖,杨陈,汤济鑫,安宁,刘建兴,刘华锋.巨噬细胞条件性 Atg 5 基因敲除小鼠的构建及鉴定[J].中国实验动物学报,2019,27(6):770~775.
巨噬细胞条件性 Atg 5 基因敲除小鼠的构建及鉴定
Construction and identification of macrophage-conditional Atg 5-knockout mice
投稿时间:2019-06-11  
DOI:10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2019. 06. 013
中文关键词:  巨噬细胞   Atg 5 基因  基因敲除  自噬  基因型鉴定
英文关键词:macrophage   Atg 5 gene  gene knockout  autophagy  genotype identification
基金项目:
作者单位E-mail
黄小荣 广东医科大学附属医院肾病研究所,湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,湛江 524001 1028781793@ qq.com 
黄衍恒 广东医科大学附属医院肾病研究所,湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,湛江 524001 396852647@ qq.com 
叶霖 广东医科大学附属医院肾病研究所,湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,湛江 524001 471775761@ qq.com 
杨陈 广东医科大学附属医院肾病研究所,湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,湛江 524001  
汤济鑫 广东医科大学附属医院肾病研究所,湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,湛江 524001  
安宁 广东医科大学附属医院肾病研究所,湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,湛江 524001  
刘建兴 广东医科大学附属医院肾病研究所,湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,湛江 524001  
刘华锋 广东医科大学附属医院肾病研究所,湛江市慢性肾脏病防控重点实验室,湛江 524001 hf-liu@ 263.net 
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中文摘要:
      目的 构建并鉴定巨噬细胞条件性 Atg 5 基因敲除小鼠,为研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供动物模型?方法 将引进LysM-Cre 小鼠与 Atg 5flox/ + 小鼠进行杂交? Atg 5flox/ + 小鼠自交,分别获得基因型为 Atg 5flox/ + Cre +/ - Atg 5flox/ flox Cre -/ -的子代小鼠;将上述两种基因型的子代小鼠杂交,得到巨噬细胞条件性 Atg 5 基因敲除小鼠( Atg 5 flox/ flox Cre +/ - , Atg 5 -/ - )和对照小鼠( Atg 5 flox/ flox Cre -/ - , Atg 5+/ + )?提取小鼠鼠尾组织基因组DNA,经PCR 扩增及琼脂糖凝胶电泳后,在DNA 水平判断小鼠基因型;提取小鼠骨髓来源巨噬细胞RNA 和蛋白,利用基因测序和Western blot 技术检验 Atg 5 基因的敲除效果?结果 成功建立巨噬细胞条件性 Atg 5 基因敲除小鼠模型,该小鼠存活并且可育?在基因及蛋白水平上,巨噬细胞 Atg 5 基因敲除成功;且与 Atg 5+/ +小鼠相比, Atg 5 -/ -小鼠自噬基础水平低下(p62 明显增多,LC3 II 明显减少),对于自噬激活剂雷帕霉素刺激不能恢复到正常基础水平?结论 利用 Cre / loxp 系统,本研究成功构建并鉴定出条件性巨噬细胞 Atg 5 基因敲除小鼠,为在动物水平研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供研究平台?
英文摘要:
      Objective To construct and identify macrophage-conditional Atg 5-knockout mice to provide an animal model for studying the role of macrophage autophagy in the pathogenesis of renal diseases. Methods LysM-Cre mice were hybridized with Atg 5flox/ + mice, and Atg 5flox/ + mice were self-crossbred to obtain progeny mice with Atg 5flox/ + Cre +/ - and Atg 5flox/ flox Cre -/ - . The progeny mice of the above two genotypes were then hybridized to obtain macrophage-conditional Atg 5 gene-knockout mice ( Atg 5flox/ flox Cre +/ - , Atg 5 -/ - ) and control mice ( Atg 5flox/ flox Cre -/ - , Atg 5+/ + ). The phenotypes of the mice were determined via electrophoresis of DNA that had been extracted from mouse tail tissue and amplified via PCR. Mouse bone marrow-derived macrophage RNA and protein were extracted, and Atg 5 gene expression was tested via sequencing and Western blotting. Results A macrophage-conditional Atg 5-knockout mouse model was established; these mice survived and were fertile. The macrophage Atg 5 gene was successfully knocked out at both the gene and protein levels. The basic macrophage autophagy level in the Atg 5 -/ - mice was much lower than that in the Atg 5+/ + mice (p62 was significantly increased, and LC3II was significantly reduced) and could not be restored to the basic level without deleting Atg 5 after stimulation with the autophagy activator rapamycin. Conclusions Macrophage-conditional Atg 5 - knockout mice are successfully constructed and identified via the Cre / loxp system, providing a research platform for studying the role of macrophage autophagy in renal disease pathogenesis at the animal level.
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