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常秋荣,刘丽丽,王会阳,付丽,邢凤英,李垚,陈学进,李善刚.利用CRISPR-Cas9 敲除Tyr 基因制作白化C57BL/ 6N 小鼠[J].中国实验动物学报,2019,27(4):493~500.
利用CRISPR-Cas9 敲除Tyr 基因制作白化C57BL/ 6N 小鼠
Knockout of Tyr gene by CRISPR-Cas9 to produce albino C57BL / 6N mice
投稿时间:2019-02-14  
DOI:10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2019. 04. 011
中文关键词:  白化  Tyr  基因敲除  CRISPR-Cas9  C57BL/6N  小鼠
英文关键词:Albino  Tyr  gene knockout  CRISPR-Cas9  C57BL/6N  mouse
基金项目:
作者单位E-mail
常秋荣 上海交通大学医学院实验动物科学部,上海 200025 cqrchang@ 163.com 
刘丽丽 上海交通大学医学院实验动物科学部,上海 200025  
王会阳 上海交通大学医学院实验动物科学部,上海 200025  
付丽 上海交通大学医学院实验动物科学部,上海 200025  
邢凤英 上海交通大学医学院实验动物科学部,上海 200025  
李垚 上海交通大学医学院实验动物科学部,上海 200025  
陈学进 上海交通大学医学院实验动物科学部,上海 200025 chenxuejin@ shsmu.edu.cn 
李善刚 1. 上海交通大学医学院实验动物科学部,上海 200025
2. 昆明理工大学灵长类转化医学研究院,昆明 650500 
lis101@ 163.com 
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中文摘要:
      目的 为了获得白化的C57BL/6N 小鼠,扩大其在皮肤移植和胚胎干细胞方面研究中的应用。方法 通过体外设计合成Cas9 mRNA 和系列sgRNA (single guide RNAs),注射到小鼠的受精卵内,破坏合成C57BL/6N 小鼠黑色素生成必须的酪氨酸酶(tyrosinase, TYR)基因序列的第1 和第2 外显子,产生基因突变,获得F0 代白化的C57BL/6N 小鼠,然后经过重复回交和自交,形成白化C57BL/6N 小鼠近交系。结果 经过注射两对sgRNA,成功的获得了F0 代的白化小鼠,在Tyr 基因的第1 和第2 外显子中均发生了缺失突变,小鼠可以将突变基因传递给后代,并在其后代中产生了纯合的白色C57BL/6N 小鼠,最后对白化小鼠突变类型进行了分析。结论 通过CRISPR-Cas9 技术破坏了小鼠Tyr 基因,成功地建立了白化C57BL/6N 小鼠近交系,为将来的嵌合体制作、组织移植提供了新的研究工具。
英文摘要:
      Objective  To obtain albino C57BL/6N mice and expand their application in research of skintransplantation and embryonic stem cells. Methods Cas9 mRNA and a series of single guide RNAs (sgRNAs) weresynthesized in vitro and injected into the fertilized eggs of C57BL/6N mice. The gene encoding tyrosinase (TYR), anenzyme necessary for melanin production in C57BL/6N mice, was destroyed in exon 1 and exon 2, and gene mutations weregenerated to obtain albino F0 generation. Albino C57BL/6N mice were then subjected to repeated backcrossing andinbreeding to produce C57BL/6N albino mouse inbreds. Results Two pairs of sgRNA were injected into mice, and the F0generation of albino mice was successfully obtained. Deletions in both exon 1 and exon 2 of the Tyr gene were confirmed.The albino mice transmited the mutant gene to offsprings, and homozygous white C57BL/6N mice as offspring wereconfirmed. The mutation types of albino mice were analyzed. Conclusions The mouse Tyr gene is disrupted by CRISPRCas9technology, and the C57BL/6N albino mouse inbred line is successfully established. This mouse line provides a new research tool for future chimera preparation and tissue transplantation.
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